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CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9

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CRISPR/Cas9 是一种能够对基因组的特定位点举行准确编辑的手艺。其原理是核酸内切酶Cas9卵白通过导向性RNA（guide RNA, gRNA）识别特定基因组位点并对双链DNA举行切割，造成DNA双链断裂，细胞使用非同源最后毗连(Non homologous End Joining，NHEJ）或者同源重组（Homologous Recombination, HR）方式对切割位点举行修复，实现DNA水平基因敲除或准确编辑。
　　CRISPR/Cas9 系统主要由两部门组成：
　　1. 单链的guide RNA（single-guide RNA，sgRNA）
　　2. 有核酸内切酶活性的Cas9 卵白

 CRISPR基因敲除

　　以基因敲除为目的时，可以使用Cas9-sgRNA对DNA举行切割发生双链断裂，随后细胞通过非同源最后毗连方式修复DNA，在此历程中，将随机引入碱基的缺失或zeng加，基因发生移码突变，导致编码基因的敲除。　　

CRISPR基因编辑　　

　　以基因敲入或替换为目的时，需要jie助同源重组原理。CRISPR/Cas9系统中的Cas9-sgRNA在靶位点举行切割发生DNA双链断裂，在模板DNA存在时，细胞通过同源重组方式修复DNA，而模板DNA可襶uan蝗宋杓瞥尚枰迦氲幕蚧蛐枰薷吹幕，此时细胞编码目的基因。

载体的选择（部门）

　　提供病毒载体的含Cas9卵白的单载和双载系统，可凭证目的基因序列设计多条gRNA，载体带有多种荧光抗衴uan昙，利便筛选。
载体种别 编号 载体元件
CRISPR慢病毒单载体 H5070

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
H7072

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
H6825

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
CRISPR慢病毒双载体 H5068

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE
H5450

pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPRE
CRISPR  AAV单载系一切 H6941

pAAV-CMV-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
H5273

pAAV-hSyn-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
CRISPR  AAV双载系一切 H6291

pAAV-CMV-EGFP-WPRE-U6-spgRNA v2.0

H12663

pAAV-U6-shRNA/spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE

H11012

pAAV-CMV-Luc2-WPRE-U6-spgRNA

 病毒载体服务流程
 

  • 物种及目的基因名称
    病毒载体要求与选择
    其它特殊需求
  • Cas9病毒载体构建
    病毒包装与纯化
    滴度测定
  • 高滴度的病毒颗粒
    an条约提供对照病毒
    实验陈诉
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